来一水AV@lysav|粗大的内捧猛烈进出|久久天天操夜夜操狠狠|亚洲欧美精品9191

您好!歡迎訪問和元李記(上海)生物技術(shù)有限公司網(wǎng)站!
咨詢熱線

18616108315

當(dāng)前位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑說明書,高效轉(zhuǎn)染試劑使用方法

真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑說明書,高效轉(zhuǎn)染試劑使用方法

更新時(shí)間:2024-02-04      點(diǎn)擊次數(shù):1819

EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑作為新一代的轉(zhuǎn)染試劑,其轉(zhuǎn)染原理是帶正電的陽離子聚合物與核酸中帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用,并通過胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞。本產(chǎn)品經(jīng)過李記生物的優(yōu)化處理,具有轉(zhuǎn)染效率高,細(xì)胞毒性低,操作簡單,重復(fù)性好,適用范圍廣等特點(diǎn)。

以下為真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑說明書:

轉(zhuǎn)染試劑運(yùn)輸與保存

藍(lán)冰運(yùn)輸。4℃保存,有效期12個(gè)月。】:不可冷凍!

高效轉(zhuǎn)染試劑使用方法(以 24 孔板為例,其他培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染請參考表1)

1. 接種細(xì)胞

對于貼壁細(xì)胞,轉(zhuǎn)染前18-24 h進(jìn)行鋪板(不含抗生素),使其在轉(zhuǎn)染時(shí)的密度大約在80%左右。對于懸浮細(xì)胞,轉(zhuǎn)染當(dāng)天,配制EZ Trans-DNA復(fù)合物之前進(jìn)行鋪板,每500 µL生長培養(yǎng)基中加入4~8×105cells。  

【注】:培養(yǎng)液中的血清不影響轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類型及其他實(shí)驗(yàn)條件影響,建議初次使用時(shí)設(shè)置梯度進(jìn)行優(yōu)化最佳使用量。

2. 準(zhǔn)備EZ Trans-DNA復(fù)合物

(1)對于每孔細(xì)胞,將1 μg質(zhì)粒DNA稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基(或者OPTI-MEM Ⅰ 培養(yǎng)基),混勻。

(2)對于每孔細(xì)胞,將3 μL EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基(或者OPTI-MEM Ⅰ 培養(yǎng)基),輕輕混勻。

【注】:無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基是稀釋液,不能使用含血清的培養(yǎng)基進(jìn)行DNA和EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑的稀釋。因?yàn)镋Z Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成過程不能含有血清。

(3)將稀釋好的EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒DNA中,輕輕混勻。

【注】:此混合的順序不能反向進(jìn)行。

(4)室溫放置10-15 min,以形成EZ Trans-DNA復(fù)合物。

3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞

(1)將上述80 μL EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物均勻滴入到含細(xì)胞的培養(yǎng)皿中。輕輕晃動培養(yǎng)皿或輕微振蕩,讓EZ Trans-DNA復(fù)合物分散均勻。

(2)在37℃,5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)6-18 h,去除含EZ Trans-DNA復(fù)合物的培養(yǎng)液,更換新的培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)至對轉(zhuǎn)入基因表達(dá)分析。

【注】:篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,轉(zhuǎn)染細(xì)胞24 h后,將細(xì)胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中(將細(xì)胞稀釋10倍以上),在37℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育24 h,加入篩選培養(yǎng)基。在有轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的藥物篩選條件下,約 1~2周可篩選到耐藥性克隆,在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。

注意事項(xiàng)

  1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

微信咨詢
地址:上海市浦東新區(qū)紫萍路908弄 傳真:021-50724961
©2024 和元李記(上海)生物技術(shù)有限公司 版權(quán)所有 All Rights Reserved.  備案號:滬ICP備2023007219號-1
色橹橹欧美在线观看视频高清| 免费人成视频在线| 国产精品久久久久伊人| 久久er热免费视频综合成人网 | 久久毛片av| 无码国产精成人午夜视频一区二区| 国产精品久久久久久妇女| 国产又猛又粗又长又黄的视频| 无码人妻精品一区二区三区在线| 欧美激情性做爰免费视频| 欧美性猛交XXXX| 欧美牲交a欧美牲交aⅴ无码| 亚洲中文字幕永久网站| 日韩精品一区二区三区含羞含羞草 | 欧美巨鞭大战丰满少妇| 宝贝腿开大点我添添公交车| 少妇愉情理伦片高潮日本| 欧美ws色图| 老头猛挺进小雯的体内视频| 国产又粗又硬又长又爽的演员| 亚洲色情天天干| 亚洲国产成人精品无码区99| 精品视频无码一区二区三区 | se94se在线亚洲视频| 人人妻,天天操,夜夜爽| 国产免费一区二区视频| 综合色区偷拍| 国产乱码精品一区二区三区中文| 亚洲人成亚洲人成在线观看| 国产成人综合在线观看| 欧美牲交a欧美牲交| 日本一区二区三区四区视频在线播放 | 无码精品一区二区三区在线| 欧美HD特大另类| 欧美亚洲一区二区三区高清免费| 最近免费中文字幕大全免费版视频| 丰满多毛的大隂户毛茸茸 | 久久精品无码专区免费青青| 国偷自产AV一区二区三区123| 亚洲欧美国产精品无码中文字| 国产午夜激无码av毛片不卡|